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天津質(zhì)譜醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室

Tianjin 

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详细内容

氨基酸分析、氨基酸檢測(cè)

  一:項(xiàng)目介紹

    氨基酸是生命的基石,疾病與健康狀況都與氨基酸有直接或間接的關(guān)聯(lián)。氨基酸涉及代謝、腫瘤、免疫、心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)、腎病、糖尿病、亞健康、老年病等各類疾病和人體生長(zhǎng)發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)健康、肌肉骨骼生長(zhǎng)、激素分泌、解毒功能等各個(gè)健康環(huán)節(jié)。目前氨基酸代謝障礙所引起的疾病已超過400多種。氨基酸的檢測(cè)已經(jīng)成為健康診斷和疾病篩查的重要手段,同時(shí)又可以作為各類人群治療、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充的參考。

    常見的氨基酸檢測(cè)方法有3種:高效液相色譜法(HPLC)、氨基酸分析儀和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(LC-MS/MS)。LC-MS/MS法測(cè)定體內(nèi)化合物,具有選擇性好,靈敏度高,分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn),已普遍地應(yīng)用于生物體內(nèi)研究;诎被苌鷺(biāo)記的LC-MS/MS氨基酸定量技術(shù)和傳統(tǒng)方法相比,從準(zhǔn)確度、精密度、檢測(cè)范圍和檢測(cè)結(jié)果都有了很大的提高和改善!鞍被豳|(zhì)譜檢測(cè)與代謝組學(xué)分析”項(xiàng)目(以下簡(jiǎn)稱“項(xiàng)目”)采用此技術(shù)進(jìn)行人體45+種氨基酸檢測(cè),能全面準(zhǔn)確的測(cè)定體內(nèi)氨基酸水平,并通過對(duì)人體內(nèi)45+種氨基酸檢測(cè)結(jié)果的的精確分析,來揭示人體內(nèi)詳細(xì)的氨基酸代謝狀況?稍u(píng)估多種健康系統(tǒng),結(jié)果簡(jiǎn)明易懂,同時(shí)可以明確地根據(jù)直觀圖表判斷體內(nèi)的氨基酸水平,提供個(gè)體的營(yíng)養(yǎng)、代謝、健康狀況評(píng)估結(jié)果,并提供相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)改善和干預(yù)建議。


二:技術(shù)特點(diǎn)

 “項(xiàng)目”特點(diǎn)是采用了LC-MS/MS檢測(cè)技術(shù),全部使用同位素內(nèi)標(biāo),并結(jié)合氨基酸代謝組學(xué)進(jìn)行分析。與傳統(tǒng)的氨基酸檢測(cè)相比,主要有以下九大優(yōu)勢(shì):結(jié)果準(zhǔn)確、嚴(yán)格區(qū)分同分異構(gòu)體、雙質(zhì)控體系、檢測(cè)范圍寬、高通量分析、提供氨基酸代謝組學(xué)分析、報(bào)告結(jié)果準(zhǔn)確明了等,以下分項(xiàng)詳細(xì)說明:

1. 基于氨基衍生的LC-MS/MS技術(shù),結(jié)果準(zhǔn)確。

LC-MS/MS采用外標(biāo)曲線定量,內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn),每種氨基酸都有自己獨(dú)立的標(biāo)準(zhǔn)曲線,確保檢測(cè)的可靠性和精確性。

注:本項(xiàng)目所有指標(biāo)(50AA)的標(biāo)準(zhǔn)曲線R值均大于0.99

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2. 嚴(yán)格區(qū)分、精確測(cè)定同分異構(gòu)體。

氨基酸為小分子化合物,平均分子量只有120 da,很多氨基酸都是同分異構(gòu)體,高效液相色譜和氨基酸分析儀對(duì)這類氨基酸很難完全分開檢測(cè)。“項(xiàng)目”嚴(yán)格區(qū)分、精確測(cè)定的同分異構(gòu)體主要有以下幾組:肌氨酸(Sar)、ß丙氨酸(ß-ALA)、丙氨酸(ALA);;γ-氨基丁酸(GABA)、ß氨基異丁酸(ß-AIBA)、α氨基丁酸(AABA);亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(Ile)、正亮氨酸(NIe)。

這些氨基酸雖然結(jié)構(gòu)相似,但生理功能卻不盡相同。例如肌氨酸(Sar)主要存在肌肉組織,是前列腺癌的生物標(biāo)記物,也是葉酸缺乏的生物標(biāo)志物。而丙氨酸(ALA)則參與DNA降解,體內(nèi)隨支鏈氨基酸的消耗而減少,升高則抑制;撬。如果檢測(cè)過程不能嚴(yán)格區(qū)分這兩種氨基酸,則檢測(cè)結(jié)果的意義就無法分析。

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3. 雙質(zhì)控,確保檢測(cè)的可靠性。

“項(xiàng)目”分別選取了正亮氨酸(NIe)和正纈氨酸(Nva)做為雙質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),分別做為定量校準(zhǔn)和衍生化效率的指標(biāo),從多個(gè)層面確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 檢測(cè)氨基酸代謝路徑上的關(guān)鍵點(diǎn)位,覆蓋面廣,可以總體展示氨基酸代謝平衡問題。

人體內(nèi)包含很多氨基酸,重要的有40余種(包含8種必須氨基酸、2種半必須氨基酸、10多種人體可以自身合成的氨基酸和其它的組成蛋白質(zhì)的重要氨基酸,見圖4),我們稱之為全譜氨基酸,基本涵蓋了氨基酸代謝通路上的關(guān)鍵位點(diǎn)。氨基酸代謝組學(xué)是針對(duì)氨基酸代謝過程的組學(xué),效仿基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研究思想,對(duì)生物體內(nèi)所有氨基酸進(jìn)行定量分析,并尋找生理病理變化的相對(duì)關(guān)系的研究方式,是系統(tǒng)生物學(xué)研究的一部分。

5.一次檢測(cè)可以同時(shí)定量50種氨基酸,實(shí)現(xiàn)了高通量分析。 

液質(zhì)聯(lián)用采用同位素內(nèi)標(biāo)法,實(shí)現(xiàn)了高通量檢測(cè),可以同時(shí)定量42種氨基酸,涵蓋氨基酸代謝組學(xué)上的關(guān)鍵點(diǎn)位。 

6. 結(jié)合氨基酸代謝組學(xué)的理論,綜合分析。

通過我們的研究,現(xiàn)已初步建立起適用于中國(guó)人群的正常血氨基酸水平。“項(xiàng)目”檢測(cè)和分析最終共計(jì)85項(xiàng)指標(biāo),從多個(gè)角度評(píng)價(jià)人體內(nèi)氨基酸代謝平衡。

7. 為臨床營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充與干預(yù)提供理論支持。

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針對(duì)氨基酸代謝失衡的個(gè)體,“項(xiàng)目”從氨基酸代謝組學(xué)的角度分析了改善的可行性措施。氨基酸代謝的失衡有時(shí)需要特定氨基酸的補(bǔ)充,有時(shí)更需要從氨基酸的代謝通路出發(fā),對(duì)氨基酸的代謝通路進(jìn)行抑制或激活。項(xiàng)目”改變了傳統(tǒng)做法中盲目補(bǔ)充氨基酸的弊病。

實(shí)際例子:酪氨酸是一種重要氨基酸,它和人體的應(yīng)激、疲勞、抑郁、血壓不穩(wěn)、低甲狀腺素綜合癥等相關(guān),也是合成甲狀腺素、腎上腺皮質(zhì)激素、多巴胺的前體。酪氨酸偏高時(shí),需要補(bǔ)充輔助因子,包括鐵、銅、維生素B6等來改善酪氨酸的代謝通路。

8. 及早的預(yù)知人體的健康隱患,可作為健康的預(yù)警指標(biāo)。

氨基酸的代謝失衡是某些疾病的表現(xiàn)形式,在疾病的初期,臨床上還沒有明顯的臨床指征時(shí),氨基酸可能已經(jīng)發(fā)生了異常變化,“項(xiàng)目”對(duì)氨基酸平衡狀態(tài)的檢測(cè)可以及早的預(yù)知這些疾病,提示人們更多的注意改善或及早的預(yù)防,避免情況惡化。例如:動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成等心腦血管疾病的人群常伴有同型半胱氨酸(HCY)代謝異常而導(dǎo)致體內(nèi)的Hcy水平升高的現(xiàn)象。

氨基酸的代謝失衡也是某些疾病的誘因,體內(nèi)的氨基酸失衡積累造成身體的病變,對(duì)于因?yàn)榘被崾Ш庾鳛檎T因而產(chǎn)生的不良狀況或疾病,“項(xiàng)目”對(duì)氨基酸平衡狀態(tài)的檢測(cè)尤為重要,及早的檢測(cè)可以及早的干預(yù),利于恢復(fù)和愈后。

9. 全面采用三色體系,結(jié)果直觀而且清晰。

“項(xiàng)目”報(bào)告采用三色體系表示檢測(cè)和分析結(jié)果,藍(lán)、綠、紅色分別表示偏低、正常和偏高,使用圖表而非枯燥的數(shù)據(jù)使得報(bào)告簡(jiǎn)捷明了。

屏幕截圖 2022-12-28 083527.jpg

三:技術(shù)對(duì)比

常見的氨基酸檢測(cè)方法有3種:HPLC(高效液相色譜法)、氨基酸分析儀和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)。氨基酸(血液、生理液)3種主要檢測(cè)方法比較見表1。LC-MS/MS集高效液相色譜的高分離性能與質(zhì)譜的高靈敏度、高專屬性的優(yōu)點(diǎn)于一體,因?yàn)槠鋵?duì)多數(shù)藥物結(jié)構(gòu)的通用性、檢測(cè)的專屬性和靈敏度等各方面的優(yōu)勢(shì),已迅速成為體內(nèi)藥物分析中采用的主要分析方法!绊(xiàng)目”采用LC-MS/MS檢測(cè)技術(shù),每種氨基酸都有自己對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品來定量,使得氨基酸的檢測(cè)結(jié)果更精確、可靠。同時(shí),LC-MS/MS是一種高通量的檢測(cè)方法,檢測(cè)周期短,同時(shí)精確檢測(cè)45+種氨基酸,覆蓋了人體氨基酸代謝組學(xué)上的重要的關(guān)鍵為點(diǎn)。準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)結(jié)果也使得氨基酸代謝組學(xué)分析更科學(xué)。

項(xiàng)目

HPLC(高效液相色譜)

氨基酸分析儀

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

方法流程

反相色譜分離、衍生;外標(biāo)定量

離子交換分離、茚三酮衍生;外標(biāo)定量

色譜分離、質(zhì)譜分離檢測(cè);

外標(biāo)定量、內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)

檢測(cè)器

熒光、UV

可見光

質(zhì)譜

檢測(cè)范圍

18種氨基酸

18種氨基酸或更多

45+種氨基酸或更多

檢測(cè)時(shí)間

60分鐘

生物樣本70分鐘

20分鐘

樣本要求

需要水解,血樣生物樣本基質(zhì)干擾大

可直接檢測(cè)血樣、生物樣本,基質(zhì)干擾大

可直接檢測(cè)血樣、生物樣本,基質(zhì)干擾小

優(yōu)點(diǎn)

儀器成本低廉,適合低端工業(yè)化產(chǎn)品檢測(cè)

適合低成本,對(duì)檢測(cè)結(jié)果要求不高,一次檢測(cè)樣本量少的試驗(yàn)

分析時(shí)間短;檢測(cè)范圍寬,涵蓋生理重要氨基酸;檢測(cè)精度好;分離度好,嚴(yán)格區(qū)分同分異構(gòu)體;使用外標(biāo)定量、內(nèi)標(biāo)定性,準(zhǔn)確判斷質(zhì)譜峰,屏蔽了基質(zhì)的干擾,確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠

缺點(diǎn)

對(duì)樣本處理要求嚴(yán)格;氨基酸分離度差,同分異構(gòu)體很難分離;用外表法,當(dāng)分離度差時(shí)無法準(zhǔn)確確定樣本的色譜峰,引起結(jié)果的不可靠性

基質(zhì)復(fù)雜的生物樣本干擾信息大,易出假陽性結(jié)果

對(duì)血樣生物樣本分析時(shí)間長(zhǎng),不能做高通量的分析手段;使用外標(biāo)法,當(dāng)分離度差時(shí)無法準(zhǔn)確確定樣本的色譜峰,引起結(jié)果的不可靠性

基質(zhì)復(fù)雜的生物樣本干擾信息大,易出假陽性結(jié)果

成本高,適合對(duì)檢測(cè)結(jié)果要求嚴(yán)格的科學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)

四:項(xiàng)目意義

      氨基酸質(zhì)譜檢測(cè)與代謝組學(xué)分析項(xiàng)目使用了液相串聯(lián)質(zhì)譜儀,使用同位素內(nèi)標(biāo)的方法,對(duì)氨基酸代謝組學(xué)各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)的氨基酸進(jìn)行了精確的測(cè)定。并利用氨基酸代謝組學(xué)的基本理念來分析結(jié)果,為臨床提供科學(xué)化的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)意見!绊(xiàng)目”對(duì)氨基酸平衡狀態(tài)的檢測(cè)可以及早的預(yù)知這些疾病,提示人們更多的注意改善或及早的預(yù)防,避免情況惡化,利于恢復(fù)和愈后。

      氨基酸是人體的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),氨基酸代謝組學(xué)涉及眾多健康領(lǐng)域,包括營(yíng)養(yǎng)、腫瘤、血糖異生、肌肉組織代謝、神經(jīng)系統(tǒng)、肝病、腎衰、智力、記憶力等等。目前我院開展的研究已充分驗(yàn)證了氨基酸失衡和營(yíng)養(yǎng)不良、慢性肝病、強(qiáng)迫癥、糖尿病、腎衰、肌肉萎縮、前列腺癌等之間的相關(guān)性,為臨床的干預(yù)和治療提供參考性意見。

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適用范圍

營(yíng)養(yǎng)評(píng)估、疾病篩查和疾病診斷(氨/能量代謝系統(tǒng)、必需氨基酸營(yíng)養(yǎng)系統(tǒng)、葡萄糖異生作用、神經(jīng)內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)、尿素循環(huán)代謝系統(tǒng)、中樞神經(jīng)代謝系統(tǒng)、軟骨結(jié)締組織系統(tǒng)、解毒標(biāo)記物、脂肪代謝系統(tǒng)、肝臟代謝系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、鎂代謝系統(tǒng)、肌肉生長(zhǎng)代謝系統(tǒng))。



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